Разруб свинины

Выявление возбудителей Сибирской язвы.
Сущность метода выявления бацилл сибирской язвы заключается в определении их характерной морфологии в мазках-отпечатках, типичного роста на питательных средах и установлении патогенности путем заражения лабораторных животных.
Бациллы сибирской язвы обнаруживают в три последовательных этапа: бактериоскопия мазков из патологического материала; получение и изучение свойств чистой культуры на питательных средах; биологическая проба на лабораторных животных и при необходимости серологическое исследование. В случае доставки загнившего материала исследование проводят только по реакции преципитации.

 

Микроскопия мазков. 
При бактериоскопии мазков из патологического материала обращают внимание на форму и расположение отдельных микробов и наличие капсул. Характерный вид сибиреязвенных палочек и обилие их в мазке нередко позволяют поставить диагноз по результатам бактерйоскопического исследования.
Микроскопическому исследованию подвергают мазки из крови уха или другого материала. Для приготовления мазков из крови уха его рекомендуется приколоть шилом с двух противоположных сторон к доске, застеленной полиэтиленовой пленкой или пергаментом; затем отпрепарировать кожу, подрезать несколько кровеносных сосудов у основания уха и, проведя вдоль по сосуду скальпелем, выдавить каплю крови, которую этим же скальпелем наносят на предметное стекло для мазка и на поверхность агаровой среды у одного края чашки. Подсушенные мазки фиксируют на пламени или химическим методом, затем окрашивают по Граму и на капсулы — по Ребигеру, Ольту, 0,1 %-ным спирто-водным раствором метиленовой сини или другим способом.
В мазках, окрашенных по Граму, возбудитель сибирской язвы — прямая грамположительная палочка. Палочки располагаются короткими цепочками или попарно, концы их, обращенные друг к другу, резко обрублены, свободные концы обычно закруглены. В отдельных случаях в мазках (чаще от свиней) форма микробов сибирской язвы может быть нехарактерна: они имеют вид коротких, толстых, изогнутых или зернистых палочек со вздутием посередине или на концах.
В мазках из свежего патологического материала сибиреязвенные палочки окружены капсулой; в мазках из несвежего материала микробы нередко теряют характерную морфологию — они могут быть несколько увеличены, концы закруглены или наоборот - бациллы и слабоокрашенные капсулы как бы йзъедены.
По результатам микроскопического исследования немедленно дают предварительный ответ.

Культурально-биохимические свойства. 
Посевы из крови уха или другого патологического материала проводят не только на МПА в пробирках или чашках, но и на МПБ и выдерживают в термостате при температуре 36—37 °С в течение 18—24 ч. При отсутствии роста посевы оставляют в термостате еще 2 сут.
На МПА микроб образует плоские матово-серые шероховатые (R-форма) колонии с извилистым краем и локонообразными отростками, напоминающими под малым увеличением микроскопа "голову медузы", "львиную гриву". Встречаются и атипичные колонии с менее выраженной шероховатостью и без отростков. Молодые колонии имеют вязкую консистенцию.
МПБ после суточного роста сибиреязвенных микробов остается прозрачным, на дне образуется рыхлый из крупных хлопьев осадок в виде комка ваты. При встряхивании пробирок бульон не мутнеет, осадок, разбивается на мелкие хлопья. Иногда в МПБ возбудитель сибирской язвы дает диффузный рост (легкое помутнение), при встряхивании образуются муаровые волны.
Из бульонной культуры делают мазки, окрашивают по Граму и исследуют под микроскопом. В мазках из типичной бульонной культуры обнаруживают длинные цепочки палочек, в то время как из бульонной культуры с диффузным ростом — отдельные или попарно расположенные палочки и редко — короткие цепочки.
Дифференциацию возбудителя сибирской язвы от сапрофитных бацилл, которые морфологически сходны, проводят по наличию капсул (в мазках из исходного материала или павших зараженных животных). В сомнительных случаях определяют подвижность посевом в полужидкий мясо-пептонный агар, гемолитические свойства на кровяных средах, характер роста на мясо-пептонном желатине, проводят люминесцентную микроскопию, фаготипирование, тест "жемчужного ожерелья", а также заражают лабораторных животных (см.табл.).
Дифференцирующие признаки микробов рода Bacillus

Микро

организмы

Подвиж ность Капсуло образо вание Гемо лити ческие свойства Рост на МПБ Рост на МПА Рост на жела­
тине в про­
бирке (посев
уколом)
Патогенность для
лабораторных
животных
Чувстви тельность к пеницил лину Чувстви тельность к специфи ческому фагу
Белые мыши Морские свинки Кролики
Вас. anthracis - + - Видимый рост
Через 6 - 7 ч
через 18 — 24 ч
осадок на дне
пробирки,
бульон проз­
рачный
Серо-белые
сухие волок­
нистые коло­нии, напоми­нающие голо­ву медузы
Перевернутая
елочка, среда
разжижается на 3 - 5-й день свер­ху
+ + + + +
Вас. cereus + - + Помут- нение,
трудно разби­
вающийся
крошко- ватый
осадок, плен­
ка и присте­
ночное кольцо
Плотные,
круглые, бе­
ловатые ко­
лонии, иног­
да окрашен­
ные в серо­
желтый цвет,
по краям из­
витые нити
Быстрое раз­
жижение, го­
ризонтальные
отростки от
укола
При массив­
ном внутри-
брюшинном
заражении
- - - -
Вас. anthraco- ides + - + Пому- тнение,
осадок в ви­
де хлопьев
Матовые во­
локнистые, с
отростками
колонии
Стеблеобраз­
ный рост с
утолщением,
сверху ворон­
ка
Не патоген­
на, редко
гибнут при
внутрибрю-
шинном заражении
большими
дозами
- - - -
Вас. pseudo- anthracis + - + Помут-нение,
с крошкова-
тым осадком
на дне, при­
стеночное
кольцо
Круглые бе­
ловатые с от­
ростками ло-
кончатые ко­
лонии
Чашкообраз­
ное разжиже­
ние
на, редко
гибнут при
внутрибрю-
шинном за­
ражении
большими
дозами
- - - -
Вас. megaterium + - - Помутнение
без пленки,
незначитель­
ный осадок
Матово-белые
морщинистые
колонии с от­
ростками
Воронкооб­
разное раз­
жижение
- - - - -
Вас. mesente- ricus + - - Муть с плен­
кой
Толстые мор­
щинистые
складчатые
матово-белые
колонии, на
конденсаци­
онной воде
пленка
То же - - - - -
Вас. mycoides + - + Бульон проз­
рачный, на дне
трудно разби­
вающийся оса­
док
Серовато-бе­
лые рыхлые
колонии
Быстрое раз­
жижение с об­
разованием
кратера
- - - - -
Вас. subtilis + - + Сначала помут­
нение, после
образо- вания
пленки буль­
он становится
прозрачным
Серовато-бе­
лые складча­
тые колонии,
пленка на кон­
денсате
На поверхно­
сти разжижен­
ного желатина
пленка
- - - - -

 


Исследование на подвижность проводят микроскопическим методом раздавленной или висячей капли или лучше путем посева исследуемой культуры уколом в столбик полужидкого агара (0,2—0,3%-ного). Посев ставят на 24 ч в термостат. Рост наблюдается по уколу, возбудитель сибирской язйы неподвижен.
Гемолитическую активность проверяют при посеве исследуемой культуры на кровяной агар или бульон. Результаты учитывают через 16—20 ч инкубации посевов в термостате. Возбудитель сибирской язвы гемолитической активностью не обладает, в то время как большинство сапрофитных спорообразующих бацилл дают бетта-гемолиз на агаре и вызывают гемолиз бульона с кровью.
Люминесцентную микроскопию проводят с использованием флуоресцирующих сибиреязвенных сывороток ”ОКВС” в соответствии с наставлением по их применению.
Фаготипирование проводят в соответствии с наставлением по применению фагов одним из следующих методов: стекающей капли, пробирочным или микрометодом с использованием сибиреязвенных бактериофагов "Гамма-МВА" или "К" ВИЭВ.

 

 

Тест "жемчужного ожерелья". 
Перед постановкой пробы готовят 3 пробирки по 10 см3 (или 3 колбы по 100 см3) МПА, в две из которых стерильно вносят пенициллин из расчета 0,5 и 0,05 ЕД на 1 см3 среды, третья остается контрольной. Агар разливают в чашки Петри и после застывания пробиркой с ровными краями делают насечки среды или вырезают пластинки 1,5 х 1,5 см, которые переносят на предметные стекла, помещенные в чашки Петри. На каждую пластийку делают высев 3-часовой бульонной культуры. Чашки закрывают крышками и помещают в термостат при 37 °С на 3 ч, а затем просматривают под микроскопом с сухой (объектив х 40) и иммерсионной системами, предварительно накрыв зону роста покровным стеклом. Сибиреязвенные микробы на МПА с пенициллином принимают шаровидную форму, а их цепочки имеют вид "жемчужного ожерелья". Спорообразующие сапрофитные аэробные микробы вырастают в виде обычных форм. На контрольном агаре сибиреязвенные микробы образуют длинные цепочки, состоящие из типичных палочек.
Постановка теста указанным методом чрезвычайно неудобна и создает трудности в соблюдении мер безопасности при работе с патогенными культурами.
В соответствии с действующим в настоящее время ГОСТ 21237—75 постановку теста "жемчужное ожерелье" можно проводить непосредственно в 3 пробирках со скошенным мясо-пептонным агаром: в первой пробирке содержится 0,5, а во второй — 0,05 ЕД пенициллина в 1 см3, третья пробирка остается контрольной (без антибиотика). В каждую пробирку вносят по 0,25 см3 3-часовой бульонной тест-культуры. Посевы выдерживают в термостате при температуре 37 °С в наклонном положении (на деревянных рейках или стеклянных трубках). Через 3 ч петлей или пастеровской пипеткой из конденсационной жидкости берут материал и готовят мазки на предметных стеклах, высушивают их на воздухе, фиксируют спирто-эфирной смесью в течение 15 мин и окрашивают по Граму, метиленовой синью или водным раствором фуксина.
При положительной реакции теста "жемчужное ожерелье" бациллы сибирской язвы образуют цепочки из шарообразных форм, имеющих сходство с ожерельем из бус. Сапрофитные споровые аэробы, как правило, дают отрицательный результат при постановке этого теста, т. е. имеют форму палочек.
Заключительный учет теста в случаях отрицательных результатов рекомендуется проводить через 6 ч после инкубации посевов в термостате при температуре 37 °С.

Постановка реакции преципитации. 
Перед постановкой реакции свежий материал предварительно выдерживают в термостате в течение 18 — 24 ч. Несвежий материал экстрагируют без выдерживания в термостате.
Экстрагирование проводят двумя способами: горячим или холодным. При этом следует учитывать, что экстракты, полученные горячим способом, беднее преципитиногенами, чем при холодном.
Горячий способ: кусочки исследуемого материала (1—2 г) помещают в пробирку или колбу, заливают физиологическим раствором в соотношении 1 : 10 и кипятят в течение 30—40 мин.
Холодный способ: кусочки материала (1 —2 г) растирают в ступке с песком, переносят в колбу или баночку, заливают карбонизированным (0,5 %-ным) физиологическим раствором в соотношении 1 : 10 и оставляют на 16 —18 ч при комнатной температуре.
Полученные экстракты фильтруют через асбестовую нейтральную вату до полной прозрачности, причем первые капли фильтрата удаляют.
Реакцию преципитации ставят путем наслаивания или по дотаивания. При наслаивании в узкую пробирку наливают 0,2—0,3 см3 прозрачной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки, затем осторожно наслаивают равное количество экстракта так, чтобы между компонентами была ясно выраженная граница (тонкая прямая линия).
При подслаивании в пробирку сначала вносят 0,2—0,3 см.куб. экстракта, затем под него осторожно пастеровской пипеткой подслаивают равное количество преципитирующей сыворотки.
Одновременно ставят контроли: заведомо сибиреязвенный антиген с сибиреязвенной преципитирующей сывороткой; нормальная сыворотка с исследуемым экстрактом и преципитирующая сыворотка с физиологическим раствором. В первом контроле на границе антигена и сыворотки должно образоваться белое кольцо, во втором и третьем — отсутствие кольца,
Реакцию считают положительной, если через 3—8 мин появляется кольцо преципитации; сомнительной, если оно образуется через 10 — 15 мин, и отрицательней — при отсутствии на границе между компонентами кольца.

Постановка биологической пробы. 
Заражение лабораторных животных исходным материалом является обязательным и проводится в день поступления материала. Исследуемый патологический материал, суспендированный в небольшом объеме физиологического раствора, вводят двум белым мышам в дозе 0,1 -0,2 см3 (по ГОСТу - 0,5 см3) подкожно в заднюю часть спины или двум морским свинкам в дозе 0,5 — 1 см3 подкожно в область живота. Гибель зараженных животных наступает через 1 -3 сут, иногда позже. Наблюдение за подопытными животными ведут 10 дней.
При исследовании материала от свиней (подчелюстные лимфатические узлы) подопытных животных заражают только полученной чистой культурой,
В случае гибели лабораторных животных их вскрывают, делают мазки и посевы из крови сердца, селезенки, печени, инфильтрата на месте инъекции исследуемого материала.
Срок бактериологического исследования мяса вынужденно убитых животных в ветеринарной лаборатории не должен превышать 3 дней, а при постановке биологической пробы — 10 дней (Инструкция о мероприятиях против сибирской язвы от 5 июня 1981 г. с дополнениями 12 ноября 1982 г.).

Учет результатов исследования. 
Диагноз на сибирскую язву считается установленным при получении одного из следующих показателей:
выделение из патологического материала культуры со свойствами, характерными для возбудителя сибирской язвы, и гибель хотя бы одного лабораторного животного из двух зараженных исходным материалом или полученной культурой с последующим выделением ее из органов павшего животного;
отсутствйе в посевах из исходного материала роста культуры, но гибели хотя бы одного лабораторного животного из двух зараженных и выделение из его органов культуры со свойствами, характерными для возбудителя сибирской язвы;
получение положительных результатов методом иммунофлуоресценции с адсорбированной сибиреязвенной сьюороткой и обнаружение капсульных бацилл в мазках из исходного патологического материала;
положительная реакция преципитации при исследовании загнившего патологического материала.

Ветеринарно-санитарная оценка. 
При установлении бактериоскопическим исследованием сибирской язвы тушу со всеми органами и шкурой, не ожидая результатов бактериологического исследования, направляют на уничтожение сжиганием при соблюдении установленных ветеринарно-санитарных правил.
Все обезличенные продукты (ноги, уши, вымя, кровь и др.), полученные от убоя других животных, смешанные с продуктами убоя от сибиреязвенного животного сжигают.
Помещение, где проведен убой животного, оборудование, инвентарь подлежат дезинфекции; рабочие проходят санитарную обработку по указанию и под наблюдением медико-санитарного надзора.
Другие туши и продукты убоя, подозреваемые в обсеменении бациллами сибирской язвы по ходу технологического процесса, немедленно подвергают обеззараживанию проваркой, но не позднее 6 ч с момента убоя, в открытых котлах в течение 3 ч с начала закипания, а в закрытых котлах при температуре 112 °С и давлении 0,05 МПа — в течение 2,5 ч. Если отсутствует возможность провести обеззараживание в указанный срок, туши изолируют при температуре не выше 10 °С, а затем направляют на обеззараживание, но не позднее 48 ч с момента убоя. В том случае, когда это выполнить нельзя, туши и продукты убоя, подлежащие обеззараживанию, направляют на утилизацию или сжигание.
При отрицательном результате бактериоскопического исследования тушу, подозреваемую в заражении сибирской язвой, изолируют до получения заключения о результатах бактериологического исследования. После подтверждения диагноза, а также в случае сомнительного результата бактериоскопического исследования и отсутствия возможности изолировать тушу, подозреваемую в заражении сибирской язвой, до установления бактериологического диагноза, тушу животного и зараженные органы утилизируют, после чего проводят дезинфекцию помещения.

switer aliexpress
6 цветов свитера 2016 Лидер продаж зима с длинными рукавами и круглым вырезом пуловеры вязаный свитер женский
938,08 руб.
Doogee_BL5000
Doogee BL5000 двойной 13.0MP Камера Мобильный телефон 5.5 дюймов fhd MTK6750T Octa core 4 ГБ Оперативная память 64 ГБ Встроенная память 12V2A quick charge 5050 мАч OTA 4 г
9 181,41 - 9 737,90 руб.
sumka aliexpress
МVA сумка кожаная большая мужская из натуральной кожи через плечо
2 893,12 руб.


Шифоновая блузка
2017 Women Clothing Chiffon Blouse Lace Crochet Female Korean Shirts Ladies Blusas Tops Shirt White Blouses slim fit Tops
715 руб.
Pisen Мобильные аккумуляторы
Pisen Мобильные аккумуляторы 10000 мАч для быстрой зарядки мобильного телефона или планшета.  2A
964,38 - 1 163,12 руб. / шт
New 2017 Spring Fashion Women sweater high elastic
New 2017 Весенняя коллекция. Женский свитер. Эластичный.
610,92 руб