Производственная инструкция для сотрудников бактериологической лаборатории
(Микробиолога)
Выявление бактерий рода Salmonella (Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы)
(по ГОСТ 31468-2012)
1. Область применения:
Настоящая инструкция применяется сотрудниками лаборатории (бактериологического отдела), при необходимости выявления бактерий рода Salmonella из мяса птицы, субпродуктов и полуфабрикатов из мяса птицы.
2. Цель:
Выявление бактерий рода Salmonella из мяса птицы, субпродуктов и полуфабрикатов из мяса птицы
3. Требования безопасности:
3.1 При подготовке и проведении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности безопасность при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007.
3.2 При подготовке и проведении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности безопасность при работе в микробиологической лаборатории с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности).
3.3 Помещение, в котором проводятся измерения, должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности, и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.1.004.
3.4 При работе с электроприборами необходимо соблюдать правила электробезопасности по ГОСТ 12.1.019.
4. Отбор и подготовка проб
Отбор и подготовка проб по ГОСТ ISO 7218, ГОСТ 7702.2.0 со следующим дополнением:
"проба для проведения испытаний должна быть представительной, не поврежденной и не измененной в процессе транспортирования, и временного хранения".
5. Метод:
5.1 Применяемые аппаратура и материалы
- весы неавтоматического действия EW-1500i (для взвешивания реактивов);
- весы электронные KERN 440-43 (для взвешивания продукта);
- лупа с увеличением 5-10
- микроскоп для морфологических исследований «МИКМЕД-1» биологический с увеличением 900-1000
- петля бактериологическая;
- стекла предметные
- гомогенизатор лабораторный
- Аквадистиллятор электрический ДЭ-10
- Термостат-инкубатор с естественной конвекцией «BINDER» ВD 115, позволяющий поддерживать заданную температуру с допустимой погрешностью ±1 °С.
- Термостат электрический суховоздушный ТС-1/80 СПУ
- Термометр стеклянный жидкостной (нертутный), с диапазоном измерения от 0 °С до 100 °С, ценой деления шкалы 1 °С.
- Шкаф сушильный ШС – 80-01 СПУ
- Спиртовка
- Емкости металлические или кастрюли, используемые для растворения, расплавления, нагревания или охлаждения питательных сред и воды.
- ножи;
- ножницы;
- палочки стеклянные
- пинцеты
- пипетки разной вместимости;
- плитка электрическая
- рН-метр;
- промывалка;
- Вата медицинская гигроскопическая
- Колбы мерные 2-50(100, 200, 500, 1000)
- Колбы конические Кн-2-100(250)-34 ТХС
- Цилиндры 1(2)-50(100)
- Пробирки П1, П2-16-150 ТС
- Чашки Петри 90 мм
- Стаканчики для взвешивания (бюксы)
- Пакеты для гомогенизации
- Вода дистиллированная
- Спирт этиловый ректификованный
- Стерилизатор паровой ВК-75-01
- Стерилизатор паровой ВК-75- ПЗ
- Холодильник-морозильник ХМ-4421-000-N «Атлант»
- Холодильник бытовой «Бирюса 542»
- Холодильник фармацевтический ХФ-250 «ПОЗИС»
- Холодильный шкаф «Хелкама» С5G
5.2 Питательные среды и реактивы
4.2.1 Среда для неселективного предварительного обогащения: забуференная пептонная вода
4.2.2 Первая селективная обогатительная среда: среда Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон)
4.2.3 Вторая селективная обогатительная среда: тетратионатный бульон Мюллер-Кауфмана (МКТ-бульон)
4.2.5 Агаризованные селективные среды для чашек.
4.2.5.1 Первая среда: ксилоза-лизин-деоксихолатный агар (XLD-aгap)
4.2.5.2 Вторая среда: Висмут-сульфит агар
4.2.6 Питательный агар
4.2.7 Мясо-пептонный агар
4.2.8 Мясо-пептонный бульон с глюкозой
4.2.9 Среды с углеводами (среды Гисса)
4.2.10 агар Клиглера,
4.2.11 Агар с мочевиной (Кристенсена)
4.2.12 L-лизин-декарбоксилазная среда
4.2.13 Реактив для определения ГОСТ Р 52814-2007 (ИСО 6579:2002) Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella-галактозидазы (или используются в соответствии с инструкцией изготовителя готовые бумажные диски)
4.2.14 Реактив для реакции Фогес-Проскауера (VP)
4.2.15 Реактивы для индольной реакции
4.2.16 Триптон/триптофановая среда
4.2.17 Бульон Хоттингера
4.2.18 Мясо-пептонный бульон с 0,05% L-триптофана
4.2.19 Полужидкий питательный агар
4.2.20 Полужидкий мясо-пептонный агар
4.2.21 Физиологический раствор
4.2.22 Бриллиантовый зеленый.
4.2.23 Вода дистиллированная
4.2.23 Желчь бычья сухая или натуральная.
4.2.24 Железо (III) аммоний цитрат.
4.2.24 Железо (III) цитрат.
4.2.25 Калия гидроокись
4.2.26 Карбамид (мочевина)
4.2.27 Креатин моногидрат
4.2.28 Ксилоза
4.2.29 L-лизин гидрохлорид
4.2.30 4-диметиламинобензальдегид
4.2.31 Магний хлористый
4.2.32 Натрий кислый селенистокислый
4.2.33 Натрий гипосульфит
4.2.34 Натрий деоксихолат.
4.2.35 о-нитрофенил ß-D-галактопиранозид (ONPG).
4.2.36 Новобиоцин натриевая соль.
4.3 Сухие агглютинирующие адсорбированные поливалентные сальмонеллезные О-сыворотки основных групп А, В, С, Д, Е и редких групп.
Vi- и Н-агглютинирующие сыворотки.
5. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
5.1 Предварительное неселективное обогащение
5.1.1 Предварительное неселективное обогащение направлено на выявление в испытуемой пробе небольшого числа бактерий рода Salmonella и поврежденных бактерий рода Salmonella.
5.1.2 Для приготовления исходной суспензии используют неселективную пептонно-буферную среду (см. 4.2.1). Для большего эффекта перед внесением навески продукта пептонно-буферную среду или другую среду для предварительного неселективного обогащения нагревают в водяной бане до температуры (37±1) °С.
Подготовленную пептонно-буферную среду или другую среду для предварительного неселективного обогащения инокулируют при комнатной температуре навеской продукта массой (25±0,1) г. Соотношение между количеством высеваемого продукта и количеством неселективной среды 1:10:(25±0,1) г пробы на (225,0±0,1) см3среды. Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (18±2) ч.
5.1.3 В случае, если масса пробы другая, чем (25±1) г, соотношение между количеством высеваемого продукта и количеством неселективной среды 1:10.
В случае если исследуют больше одной пробы от определенного продукта и когда очевидно, что объединенная навеска не влияет на результат испытания, то для уменьшения объема работы навески объединяют, соблюдая при посеве соотношение между массой общей навески и количеством неселективной среды 1:10.
5.2 Селективное обогащение
5.2.1 Культуры из среды для предварительного неселективного обогащения по 5.1 пересевают в две среды для селективного обогащения.
Для этого 0,1 см3 культуры, полученной по 5.1.2, пересевают в (10,0±0,1) см3 среды Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон) и 1,0 см3 культуры, полученной по 5.1.2, пересевают в (10,0±0,1) см в одну из сред: тетратионатный бульон (Мюллер-Кауфмана), селенитовую обогатительную, селенит-цистиновый накопительный бульон, магниевую, модифицированную полужидкую среду MSRV или другую среду для селективного обогащения.
Посевы на RVS-бульоне инкубируют при температуре (41,5±1,0) °С в течение (24±3) ч.
Посевы на тетратионатном бульоне (Мюллер-Кауфмана), магниевой, селенитовой обогатительной, селенит-цистиновых средах инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±3) ч.
При посеве на модифицированную полужидкую среду MSRV 0,1 см3 культуры из среды для предварительного неселективного обогащения пересевают на поверхность MSRV среды. Для большей селективности допускается распределить посевную дозу (0,1 см) на три точки внесения по центру чашки Петри. Посевы на модифицированной полужидкой среде MSRV инкубируют в течение (24±3) ч при температуре (41,5±1,0) °С. Чашки Петри не переворачивают. При отсутствии роста через (24±3) ч посевы дополнительно инкубируют в течение (24±3) ч. Для подвижных штаммов сальмонелл характерен диффузный рост в толще этой среды от центра к периферии.
5.2.2 На других средах, предназначенных для селективного обогащения, посевы инкубируют при температуре и с экспозицией по инструкции по их применению.
5.2.3 Прямой посев в среды для селективного обогащения
Продукты свежие, которые не были подвергнуты каким-либо физическим воздействиям (сушке, заморозке и другим воздействиям), допускается высевать непосредственно в селективные среды, исключая этап предварительного неселективного обогащения.
Соотношение между количеством высеваемого продукта и количеством селективной среды 1:10:(25,0±0,1) г пробы на (225,0±0,1) см3 среды. В случае объединения навески продукта - по 5.1.3.
5.3 Выделение чистой культуры на дифференциально-диагностических агаризованных средах и идентификация
5.3.1 Для выделения чистой культуры после инкубирования на селективных средах по 5.2 проводят высев посевного материала на две агаризованные дифференциально-диагностические среды: на XLD-arap и на одну из сред: висмут-сульфитный агар, среду Плоскирева, среду Эндо, среду Левина, бриллиантово-зеленый агар.
Для получения отдельных хорошо изолированных колоний бактериологической петлей (1 мкл) берут минимальное количество посевного материала и проводят высев штрихом по ГОСТ 26670 на поверхность чашек Петри с подсушенными дифференциально-диагностическими средами.
С модифицированной полужидкой MSRV среды (см. 8.2.1) бактериологической петлей (1 мкл) берут материал с границы зоны диффузного роста, осторожно касаясь поверхности среды, не захватывая сам агар, и переносят на поверхность дифференциальной среды штрихом по ГОСТ 26670.
Чашки Петри с посевами переворачивают вверх дном, помещают в термостат при температуре (37±1) °С и инкубируют в течение (24±3) ч. Предварительный учет результатов проводят через (24±3) ч, окончательный - через (48±3) ч.
5.3.2 После инкубирования проводят просмотр чашек Петри на присутствие типичных или не совсем типичных (подозрительных) колоний (при росте на конкретной дифференциально-диагностической среде) для бактерий рода Salmonella. Выбранные колонии отмечают на дне чашки Петри для проведения последующей идентификации.
Бактерии рода Salmonella образуют:
- на XLD-агаре:
колонии с черным центром и слегка прозрачной зоной красноватого цвета, что принадлежит цвету индикатора;
колонии розовые с темным розовым центром (H2S- отрицательные бактерии рода Salmonella, например S. paratyphi А);
колонии желтые с почернением или без него (лактозоположительные бактерии рода Salmonella);
- на среде Эндо - колонии бесцветные или слегка розоватые;
- на среде Плоскирева - колонии бесцветные прозрачные, но более плотные, чем на среде Эндо;
- на висмут-сульфит агаре:
колонии черные с характерным металлическим блеском (например, S. typhi) с пигментированием среды под колониями;
колонии зеленоватые с темно-зеленым ободком или бесцветные без пигментирования среды под колониями;
- на среде Левина - колонии прозрачные, слабо-розовые или розово-фиолетовые;
- на бриллиантовом зеленом агаре:
колонии красноватые или розовые, почти белые (их цвет зависит от штамма и срока инкубирования);
колонии зеленоватые, окруженные яркой желто-зеленой зоной (лактозоположительные и сахарозоположительные штаммы).
5.3.3 При использовании других дифференциально-диагностических сред для выявления бактерий рода Salmonella особенности роста и характеристики колоний описываются в инструкциях по их применению.
5.3.4 При отсутствии типичных или не совсем типичных (подозрительных колоний) в посевах на дифференциально-диагностических средах работу с посевами прекращают и конечный результат определяют как отсутствие бактерий рода Salmonella в анализируемой навеске (массе, объеме) продукта.
5.3.5 При наличии хотя бы на одной дифференциально-диагностической агаризованной среде колоний типичных или не совсем типичных (подозрительных колоний) для бактерий рода Salmonella проводят отбор колоний для дальнейших исследований.
5.4 Идентификация бактерий рода Salmonella
Для идентификации бактерий рода Salmonella допускается использование наборов тест-систем промышленного производства, разрешенных к применению на территории государства, принявшего стандарт. Идентификация с использованием наборов тест-систем для идентификации микроорганизмов основана на использовании стандартных биохимических микротестов. Системы используют по инструкции производителя со специальной адаптированной под микротесты базой данных (см. 7.3.12).
Для подтверждения идентификации бактерий рода Salmonella допускается использование латекс-тестов.
Для проведения идентификации бактерий рода Salmonella по биохимическим свойствам и серологическим реакциям используют только чистые культуры.
8.4.1 Отбор и подготовка колоний к идентификации по биохимическим свойствам и серологическим реакциям
С каждой чашки Петри, с дифференциально-диагностической агаризованной среды (см. 8.3.2) отбирают сначала одну колонию, типичную или не совсем типичную (подозрительную), и затем четыре колонии, если первая отрицательная.
Рекомендуется брать сразу пять колоний для идентификации в случае эпидемиологической ситуации. При наличии в одной чашке Петри менее пяти типичных или не совсем типичных (подозрительных) колоний отбирают все типичные или подозрительные колонии.
Отбор материала проводят бактериальной петлей с поверхности и центра колонии, не касаясь поверхности среды. Отобранные колонии переносят в чашки Петри на поверхность предварительно подсушенного мясо-пептонного агара (см. 7.4.31), ГРМ-агара (см. 7.4.35) или на скошенную поверхность мясо-пептонного агара в пробирках (см. 7.4.19).
Чашки Петри или пробирки с посевами инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±3) ч.
8.4.2 Окраска по Граму
Из колоний, отобранных для биохимической идентификации, готовят мазки и окрашивают по Граму по ГОСТ ISO 7218. Бактерии рода Salmonella - грамотрицательные палочки с закругленными концами.
При использовании в исследованиях тест-наборов для биохимической идентификации бактерий рода Salmonella окрашивание по Граму не обязательно.
8.4.3 Определение биохимических свойств культуры
Биохимические свойства у отобранных и предварительно пересеянных грамотрицательных культур по 8.4.1 определяют по способности ферментации глюкозы, сахарозы и маннита, расщепления мочевины, образования ацетоина, индола, ГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл-галактозидазы, L-лизиндекарбоксилазы.
Для определения биохимических свойств используют специальные среды: трехсахарный агар Олькеницкого (см. 7.4.25), среды Гисса (см. 7.4.17) либо одну из комбинированных сред: Клиглера (см. 8.4.22), Ресселя-ГРМ (см. 7.4.24) и другие комбинированные среды по 7.4.36.
Для посевов в специальные среды подготовленный материал по 8.4.1 отбирают бактериальной петлей с поверхности и центра колонии, не касаясь поверхности агара. Исследуют не менее трех типичных колоний из каждой чашки.
Полученный материал засевают штрихом по поверхности скошенной среды и уколом по центру столбика в его толщу.
Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±3) ч, после чего просматривают.
8.4.3.1 Определение ферментации сахаров
Для определения ферментации сахаров используют одну из сред по 8.4.3. Посев и инкубирование - по 8.4.3.
Интерпретация результатов по изменениям среды:
Агар Клиглера содержит два сахара, поэтому по скошенной поверхности учитывают только ферментацию лактозы:
- малиновый цвет скошенной поверхности среды указывают на ферментацию лактозы.
Среды Олькеницкого:
- пожелтение самого столбика среды указывает на ферментацию глюкозы (глюкоза положительная);
- пожелтение скошенной поверхности среды указывает на ферментацию лактозы и/или сахарозы (лактоза и/или сахароза положительная);
- красный или неизменившийся столбик среды указывает на отсутствие ферментации глюкозы (глюкоза отрицательная);
- красная или неизменившаяся скошенная поверхность среды указывает на отсутствие ферментации лактозы и/или сахарозы (лактоза и/или сахароза отрицательная);
- пузырьки или разрывы в толще среды указывают на образование газа из глюкозы;
- черный цвет среды указывает на образование сероводорода.
TSI-arap:
- пожелтение поверхности TSI-arapa (см. 7.3.18) указывает на ферментацию лактозы (лактоза положительная).
Типичные культуры бактерий рода Salmonella показывают щелочную (красную) поверхность и кислый (желтый) столбик с образованием газа (пузырьков).
Определение ферментации маннита и сахарозы
Для определения ферментации маннита или сахарозы используют среды Гисса (см. 7.4.17) с маннитом или сахарозой. Посев и инкубирование - по 8.4.3.
При ферментации маннита цвет среды изменяется.
Бактерии рода Salmonella: ферментируют глюкозу с образованием кислоты и газа или кислоты без образования газа; ферментируют маннит с образованием кислоты; не ферментируют лактозу и сахарозу.
Определение ферментации сахаров с помощью дисков с углеводами
Для определения ферментации бактериями рода Salmonella сахаров допускается использование дисков с углеводами (см. 7.3.9). Методика проведения испытаний по инструкции производителя.
8.4.3.2 Определение образования сероводорода
Для определения образования сероводорода используют одну из питательных сред: Олькеницкого (см. 7.4.25) или среду Клиглера (см. 7.4.22), или 1%-ную пептонную воду (см. 7.4.33). Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение от 24 до 72 ч.
При посеве культуры в одну из комбинированных сред об образовании сероводорода судят по почернению среды в столбике.
Типичные культуры бактерий рода Salmonella примерно в 90% случаев образуют сероводород (черный цвет среды).
8.4.3.3 Дальнейшему изучению подвергают культуры с типичными или не совсем типичными свойствами для бактерий рода Salmonella: бактерии, ферментирующие глюкозу с образованием или без образования газа, а также лактозоположительные бактерии и бактерии, не образующие сероводород, но обязательно ферментирующие глюкозу с образованием или без образования газа.
8.4.3.4 Определение расщепления мочевины
При определении расщепления мочевины используют агар Кристенсена с мочевиной (см. 7.4.15), агар тройной сахарный по 7.4.14 или другие среды по 7.4.36.
Культуры засевают штрихом по поверхности скошенной среды в пробирках. Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±3) ч, периодически наблюдая за посевами (для уреазоположительных бактерий реакция часто становится видимой уже после 2 ч инкубирования).
Агар Кристенсена
Изменение цвета фенолового красного от розового до светло-вишневого свидетельствует о расщеплении мочевины с выделением аммония - положительная реакция.
Отсутствие изменения окраски - отрицательная реакция.
Агар тройной сахарный
Восстановление изменившегося цвета среды при расщеплении глюкозы с красного или желтого до бледно-розового цвета свидетельствует о расщеплении мочевины - положительная реакция.
Отсутствие изменения окраски - отрицательная реакция.
Бактерии рода Salmonella мочевину не расщепляют.
8.4.3.5 Определение образования индола
Для определения образования индола проводят посев в пробирку, содержащую 5 см ГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл одной из питательных сред: 1%-ную пептонную воду (см. 7.4.33), бульон Хоттингера (см. 7.4.16) или в триптон-триптофановую среду (см. 7.4.20). Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±1) ч.
Пептонная вода
В пробирки с суточной культурой в пептонной воде по стенке добавляют 1 смГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл, по каплям, одного из реактивов: Эрлиха (см. 7.3.5) или Ковача (см. 7.3.6).
С реактивом Эрлиха при наличии индола не позднее чем через 5 мин в пограничном слое образуется ярко-красное кольцо - положительная реакция. Кольцо остается светло-желтого цвета - отрицательная реакция.
С реактивом Ковача результаты учитывают через 10 мин после взбалтывания. Реактив поднимается на поверхность среды и при наличии индола окрашивается в темно-красный цвет - положительная реакция.
Бульон Хоттингера, триптон-триптофановая среда
В пробирки с суточной культурой в бульоне Хоттингера (см. 7.3.16) или триптон-триптофановой среде (см. 7.3.20) по стенке добавляют 1 смГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл, по каплям, одного из реактивов: Эрлиха (см. 7.3.5) или Ковача по 7.3.6.
Не позднее чем через 5 мин образование темно-красного кольца указывает на образование индола - реакция положительная; коричнево-желтое кольцо - реакция отрицательная.
Бактерии рода Salmonella индола не образуют.
8.4.3.6 Определение образования ацетоина (реакция Фогес-Проскауера)
Для определения способности к образованию ацетоина испытуемую культуру петлей засевают в пробирки с 3 см ГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл мясо-пептонного бульона с глюкозой (см. 7.4.32) или VP среды (см. 7.4.34).
Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±3) ч. После инкубации к 1 см ГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл( )отобранной в стерильную пробирку культуральной жидкости прибавляют две капли раствора креатина моногидрата, три капли спиртового раствора 1-нафтола и две капли раствора гидроокиси калия, приготовленные по 7.3.4. Содержимое пробирки перемешивают после прибавления каждого реактива. Появление через 15 мин от розового до светло-красного окрашивания указывает на положительную реакцию. При отрицательной реакции остаток культуральной жидкости инкубируют еще (24±3) ч и тест повторяют.
Определение образования ацетоина допускается проводить без применения раствора креатина. Для этого после инкубирования к 1 см ГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл отобранной культуральной жидкости прибавляют только 0,6 см ГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл( )раствора 1-нафтола и 0,2 см ГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл раствора гидроокиси калия. После прибавления каждого реактива пробирку встряхивают. Появление розового окрашивания через 15 мин указывает на положительную реакцию. При отрицательной реакции остаток культуральной жидкости инкубируют еще (24±3) ч и тест повторяют.
Бактерии рода Salmonella не образуют ацетоина (реакция Фогес-Проскауера отрицательная).
8.4.3.7 Определение образования L-лизиндекарбоксилазы
Для определения образования L-лизиндекарбоксилазы используют L-лизиндекарбоксилазную среду (см. 7.4.27).
Жидкую L-лизиндекарбоксилазную среду инокулируют снизу бактериальной культурой и инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±3) ч.
Помутнение и пурпурный цвет среды после инкубирования - положительная реакция.
Желтый цвет среды - отрицательная реакция.
Столбик агаризованной среды с одной из аминокислот инокулируют бактериальной культурой методом укола и инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±3) ч.
Темно-красная окраска среды - положительная реакция.
Желтый цвет среды - отрицательная реакция.
Salmonella paratyphi А не образует L-лизиндекарбоксилазу, остальные декарбоксилируют лизин и образуют L-лизиндекарбоксилазу.
8.4.3.8 Определение ГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл-галактозидазной активности
В пробирку с 0,25 см ГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл физиологического раствора петлей суспендируют бактериальную культуру. К полученной суспензии прибавляют одну каплю толуола (см. 7.3.10) и пробирку встряхивают. Пробирку помещают в водяную баню при температуре (37±1) °С и оставляют примерно на 5 мин. Затем добавляют 0,25 см ГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл ГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл- галактозидный реактив (см. 7.3.11), смешивают содержимое и пробирку помещают в водяную баню или термостат при температуре (37±1) °С до (24±3) ч, наблюдая за изменением цвета через определенные промежутки времени. Изменение цвета может обнаруживаться примерно через 20 мин.
Желтый цвет суспензии - положительная реакция.
Неизменение цвета суспензии через (24±3) ч - отрицательная реакция.
Бактерии рода Salmonella, кроме Salmonella arizonae, не обладают ГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл-галактозидазой.
Для определения ГОСТ 31468-2012 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл-галактозидазной активности допускается использование ONPG-дисков (см. 7.4.28).
8.4.3.9 Интерпретация результатов биохимических испытаний
Интерпретацию результатов биохимических испытаний культур проводят, пользуясь таблицами биохимических характеристик бактерий рода Salmonella.
8.4.4 Определение подвижности
Для определения подвижности культуру высевают методом укола в пробирку со столбиком полужидкого питательного агара (см. 7.4.30). Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±3) ч.
О наличии подвижности свидетельствуют диффузный рост вокруг линии укола и помутнение столбика питательного агара, при росте культур, не обладающих подвижностью, - только по месту укола.
Бактерии рода Salmonella подвижны, кроме Salmonella gallinarum и Salmonella pullorum.
Наличие подвижности некоторых штаммов бактерий рода Salmonella представлено в приложении А.
8.4.5 Серологическая идентификация - по ГОСТ 31659 (пункт 8.5.4).
8.4.6 Интерпретация результатов испытаний выявленных культур на биохимические свойства и серологические реакции - по ГОСТ 31659 (пункт 8.5.5).
6. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
6.1 Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.
6.2 Результаты выявления бактерий рода Salmonella в определенной массе или объеме продукта записывают: "бактерии рода Salmonella обнаружены или не обнаружены в 25 г (см3) продукта".
7. Ответственность:
За выполнение данной инструкции несет ответственность сотрудник бактериологической лаборатории, выполняющий выявление бактерий рода Salmonella из мяса птицы, субпродуктов и полуфабрикатов из мяса птицы.
8. Ссылки и сокращения:
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда (ССБТ). Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности (с Изменениями N 1, 2)
ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов
