11. Приготовление питательных сред
11.1. Среды для выделения кишечной палочки
11.1.1. Модифицированная среда Хейфеца
К 1 л дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 5 г хлорида натрия и 4 г лактозы. Смесь доводят до кипения, затем фильтруют и после остывания определяют pH, который должен быть 7,4 - 7,8. Затем к среде добавляют в качестве индикатора 1 мл 5-процентного спиртового раствора розоловой кислоты и 2,3 мл 0,1-процентного водного раствора метиленовой сини. Среду разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм. 15 мин. Исходный цвет среды - красновато-сиреневый.
11.1.2. Питательная среда КОДА сухая
Состав и способ приготовления приведены в этикетке на упаковке среды.
11.2. Среды для выделения стафилококка
11.2.1. Солевой мясопептонный бульон
К обычному МПБ с pH 7,2 - 7,4 добавляют 6% натрия хлорида, х.ч. или ч.д.а., перемешивают до полного растворения соли, разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 1 атм. 20 - 30 мин.
11.2.2. Солевой мясопептонный агар
К расплавленному МПА добавляют 8% натрия хлорида, х.ч. или ч.д.а., перемешивают до полного растворения соли, разливают в колбы и стерилизуют при 1 атм. 20 - 30 мин. Перед использованием солевой агар разливают в стерильные бактериологические чашки по 10 - 15 см. После застывания среду подсушивают в термостате 1 ч.
11.3. Дифференциально-диагностическая среда для индикации Bac. anthracis
11.3.1. Приготовление растворов ингредиентов
Полимиксина М сульфат во флаконе растворяют в стерильной дистиллированной воде, а затем последовательными разведениями стерильным 0,9-процентным раствором натрия хлорида доводят до концентрации 10000 ЕД/мл.
Невиграмон переносят в стеклянный флакон или пробирку и растворяют в 25-процентном водном растворе аммиака при тщательном перемешивании стеклянной палочкой. Затем последовательно разводят стерильным 0,9-процентным раствором натрия хлорида до концентрации 100 мкг/мл.
Моющее средство "Прогресс" растворяют стерильной дистиллированной водой до 0,1-процентной концентрации.
Гризеофульвин (в таблетках) тщательно растирают в ступке, затем растворяют в стерильной дистиллированной воде до содержания 100 мкг препарата в 1 мл.
Фенолфталеинфосфат натрия (заводской 10-процентный раствор) стерилизуют 30 мин. на водяной бане при 56 °С.
11.3.2. Приготовление дифференциально-диагностической среды
100 мл питательного агара (в колбах) расплавляют в кипящей водяной бане и охлаждают до температуры 46 - 60 °С. Затем в агар добавляют 0,5 мл полимиксина М сульфата, столько же невиграмона, гризеофульвина <*>, такое же количество моющего средства "Прогресс" и 0,1 мл фенолфталеинфосфата натрия.
--------------------------------
<*> Гризеофульвин добавляют в среду при подозрении на загрязнение материала грибами.
После перемешивания среду разливают в чашки Петри (крышки открыты) и подсушивают 1,5 - 2 ч. Дифференциально-диагностическую среду после разлива можно хранить в холодильнике в течение одних-двух суток.
Готовую дифференциально-диагностическую среду выпускает Ставропольская научно-исследовательская ветеринарная станция (355100, г. Ставрополь, ул. Биологическая, 20).
11.4. Среда Сотона для выделения микобактерий
В 940 мл дистиллированной воды растворяют 4 г аспарагина, 2 - лимонной кислоты, 0,5 - калия фосфорнокислого двузамещенного, 0,5 - сернокислой магнезии и 0,05 г лимоннокислого аммиачного железа. Затем добавляют 60 мл нейтрального глицерина. После полного растворения аспарагина и солей pH среды должен быть 7,4. Среду разливают по 200 мл в колбы вместимостью 250 мл и стерилизуют 30 мин. в автоклаве при 1,5 атм.
Перед использованием в колбу со средой Сотона добавляют 30 мл стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота и разливают в стерильные пробирки по 7 - 8 мл.
12. Приготовление индикаторных пробирок для контроля качества дезинфекции аэрозолями формальдегида
Индикаторные пробирки - это стеклянные трубки диаметром 4 - 8 мм и длиной 40 - 50 мм. В качестве таких пробирок могут быть использованы пробирки Уленгута или отрезки пастеровских пипеток, запаянные с одного конца. Пробирки заливают расплавленной индикаторной средой до уровня обреза пробирок, запечатывают парафином и хранят 1 мес. (со дня изготовления) при температуре 0 - 5 °С.
Для учета результатов без линейки на индикаторные пробирки при их изготовлении можно нанести две риски на расстоянии 18 и 30 мм от среза пробирки.
Для экспресс-метода контроля качества аэрозольной дезинфекции помещений используют среду Эндо, выпускаемую биологической промышленностью в сухом виде; 2-процентную взвесь сухой среды в дистиллированной воде доводят до кипения и пропускают через ватный фильтр, после чего среду заливают в пробирки при помощи пипеток.
13. Подготовка тест-объектов для контроля качества дезинфекции спецодежды
В качестве тест-культур используют музейные штаммы кишечной палочки, золотистого стафилококка (St. aureus - штамм 209-Р) и антракоида (Bac. anthracoides - штамм 96).
Музейные культуры (после лиофильной сушки) хранят при температуре минус 4 °С не более двух лет; в виде посевов на МПА (посев уколом) под слоем стерильного вазелинового масла (толщина слоя 1,5 - 3 мм) не более шести месяцев.
Батистовую ткань стирают, гладят, нарезают на кусочки размером 5 х 10 мм, которые раскладывают по 50 шт. в чашки Петри. Чашки завертывают в плотную бумагу и стерилизуют 30 мин. в автоклаве при температуре 110 °С (0,5 атм.).
Стерильные тест-объекты в той же чашке Петри заливают смесью двухмиллиардной взвеси тест-культуры и инактивированной сыворотки крови (или 40 - 50-процентной эмульсии кала животных), взятых в соотношении 1:1 (из расчета 1 мл на 1 тест-объект). Чашку Петри закрывают крышкой и оставляют при комнатной температуре на 20 мин. Затем тест-объекты переносят в другую чашку Петри на поверхность стерильной фильтрованной бумаги, положенной в два слоя на дно чашки, покрывают сверху листом стерильной фильтровальной бумаги, чашку закрывают крышкой. Через 10 мин. тест-объекты переносят на поверхность листа стерильной фильтровальной бумаги в чашке Петри, подсушивают 20 - 30 мин. в термостате при 37 °С.
