Метод предназначен для определения массовой доли фосфора в пищевых добавках, применяемых при производстве вареных колбасных изделий.Метод основан на образовании желтого фосфорно-молибдено-ванадиевого комплекса и заключается в сухой минерализации пробы, растворении золы, проведении цветной реакции с молибдено-ванадиевым реактивом и измерении интенсивности желтого окрашивания раствора.
Метод приведен в соответствии с «Руководством по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов».
1 Аппаратура, реактивы и материалы:
вода дистиллированная по ГОСТ 6709;
калий фосфорнокислый однозамещенный, х. ч., по ГОСТ 4198;
аммоний ванадиево-кислый мета, х.ч., по ГОСТ 9336;
аммоний молибденовокислый, ч.д.а., по ГОСТ 3765;
азотная кислота по ГОСТ 4461;
серная кислота по ГОСТ 4204;
соляная кислота по ГОСТ 3118;
мерные колбы емкостью 1 дм3,50 см3 по ГОСТ 1770; по ГОСТ 12738;
спектрофотометр или фотоэлектроколориметр.
2 Подготовка к испытанию
2.1 Приготовление раствора соляной кислоты с массовой концентрацией
25 г/дм3
В мерную колбу вместимостью 1 дм3 вносят 400 см3 дистиллированной воды, добавляют 67,4 см3 концентрированной соляной кислоты и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой, перемешивают.
2.2 Приготовление раствора аммония ванадиевокислого с массовой концентрацией 2,5 г/дм3 (раствор А)
2.5 г аммония ванадиевокислого растворяют в мерной посуде вместимостью 1 дм3 в 500 см3 кипящей дистиллированной воды. После охлаждения раствора до комнатной температуры в него вносят 20 см3 концентрированной азотной кислоты. Объем раствора доводят до 1 дм3 дистиллированной водой, перемешивают.
2.6 Приготовление раствора аммония молибденовокислого с массовой концентрацией 100 г/дм3 (раствор Б)
100 г аммония молибденовокислого растворяют в мерной посуде вместимостью 1 дм3 в 500 см3 дистиллированной воде, подогретой до 50 °C. Раствор охлаждают до комнатной температуры, затем осторожно при перемешивании стеклянной палочкой вносят 100 см3 концентрированной серной кислоты. Перемешивание продолжают до достижения раствором комнатной температуры, доводят его объем до 1 дм3 дистиллированной водой, перемешивают.
2.7 Приготовление основного стандартного раствора фосфора с концентрацией 1г/дм3
Раствор готовят по ГОСТ 4212.
Раствор готовят из калия фосфорнокислого однозамещенного, предварительно высушенного до постоянной массы в сушильном шкафу при 104°С или в эксикаторе над концентрированной серной кислотой. Навеску 4,3930 г КН2РО4, взвешенную с погрешностью не более 0,001 г, растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1 дм3, доводят объем раствора до метки дистиллированной водой и перемешивают.
2.8 Приготовление молибдено-ванадиевого реактива
Реактив готовят смешиванием равных объемов растворов А и Б. Составной реактив годен в течение месяца.
2.9 Приготовление рабочего стандартного раствора
В мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят 5 см3 основного стандартного раствора фосфора с массовой концентрацией 1 г/дм3, доводят объем раствора до метки дистиллированной водой, перемешивают. Рабочий стандартный раствор готовят в день построения градуировочного графика.
2.10 Приготовление растворов сравнения
2.10.1 При проведении измерений на спектрофотометре в мерные колбы вместимостью 50 см3 вносят 1,2,3,4,5,6 см3 рабочего стандартного раствора фосфора, приготовленного по п. 2.6.1., соответственно 100, 200, 300, 400, 500 и 600 мкг фосфора, добавляют воду до объема 10 см3. В каждую колбу вносят 10 см3 разбавленной (1:9) серной кислоты, 10 см3 составного молибдено-ванадиевого реактива, доводят объем раствора до метки дистиллированной водой, перемешивают.
2.10.2 При проведении измерений на фотоэлектроколориметре в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 20 мм в мерные колбы вместимостью 50 см3 вносят 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5; 3 cm3 рабочего стандартного раствора фосфора, приготовленного по п. 2.6.1., соответственно 50, 100, 150, 200, 250 и 300 мкг фосфора, и далее по п. 2.6.2.
2.10.3 Растворы выдерживают 30 мин при температуре 20-30 °C и измеряют оптическую плотность против контрольного раствора.
2.11 Построение градуировочного графика
Градуировочный график строят, откладывая на оси абсцисс массы фосфора в мкг, на оси ординат - соответствующие им значения оптической плотности.
3 Проведение испытания
3.1 Минерализация
Минерализацию проводят сухим способом по ГОСТ 26929-94, п.п. 1.1-1.4.
Рекомендуемые величины массы навески указаны в таблице 1.
Таблица 1.
3.2 Золу, полученную по п. 3.1, растворяют в 5 см3 раствора соляной кислоты (1 + 1) при нагревании на кипящей водяной бане и раствор упаривают до влажных солей, к осадку в тигле добавляют 20 см3 раствора соляной кислоты (25 г/дм3) и нагревают на кипящей водяной бане в течение 5-10 мин. После охлаждения содержимое тигля количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3 и доводят до метки раствором соляной кислоты 25 г/дм3. Раствор перемешивают.
3.3 В мерную колбу вместимостью 50 см3 помещают аликвотный объем от 1 до 4 см3 раствора, приготовленного по п. 3.3, добавляют воду до объема 10 см3, 10 см3 разбавленной (1:9) серной кислоты, 10 см3 составного молибдено-ванадиевого реактива, доводят объем раствора до метки дистиллированной водой, перемешивают.
3.4 Измерения оптической плотности проводят на спектрофотометре в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 10 мм при длине волны 436 нм или на фотоэлектроколориметре в кюветах с расстоянием между рабочими гранями 20 мм со светофильтром Zmax= 440,5 нм.
3.5 По полученному значению оптической плотности с помощью градуировочного графика находят массу фосфора, содержащуюся в аликвотном объеме минерализата.
4 Обработка результатов
4.1 Массовую долю фосфора в мг/100г вычисляют по формуле:
где: m - масса фосфора, найденная по градуировочному графику, мкг;
V - общий объем минерализата, см3;
V1 - аликвотный объем минерализата, взятый для испытания, см3;
10 - коэффициент пересчета в мг/100 г;
М - навеска образца, г.
4.2 Результаты определений рассчитывают до третьей значащей цифры.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений.
4.3 Метрологические характеристики
Относительное допустимое расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, по отношению к среднему арифметическому значению (Rr) и относительное допустимое расхождение между результатами испытаний, выполненных в двух разных лабораториях, по отношению к среднему арифметическому значению (RR), приведены в табл. 2.
табл. 2
4.4 .Определение массовой доли фосфора в пересчете на (Р2О5.)
М2=k х M1
где к - коэффициент пересчета, равный 2,29
М1 - массовая доля фосфора в мг/100г
