При подозрении на происхождение мяса от животных, больных рожей, проводят микроскопию мазков-отпечатков, посевы на питательные среды и при необходимости заражение лабораторных животных. При подозрении на рожу из органов делают мазки-отпечатки с окраской по Граму и мазки для исследования методом флуоресцирующих антител. При хроническом течении болезни мазки делают и из пораженных клапанов сердца.
Морфологические и культуральные свойства. В положительных случаях в мазках, окрашенных по Граму, обнаруживает тонкие, прямые или слегка изогнутые грамположительные палочки, расположенные одиночно, попарно или скоплениями. При хроническом течении болезни в мазках из пораженных клапанов сердца обнаруживают длинные переплетающиеся нити.
При применении метода флуоресцирующих антител обработку и окраску мазков проводят в соответствии с Наставлением по применению сухих рожистых люминесцирующих сывороток (для прямого метода иммунофлуоресценции).
Высевы делают из крови сердца, пораженных клапанов, почки, селезенки, печени, костного мозга в МПБ или бульон Хоттингера и на МПА. Посевы инкубируют в термостате при 36—37 °С в течение 18—24 ч, а при отсутствии роста — еще сутки. При росте возбудителя рожи наблюдают очень слабое помутнение бульона без образования пристеночного кольца или пленки, при встряхивании пробирки хорошо заметны муаровые волны. Через 48—72 ч наступает просветление бульона и на дне пробирки образуется осадок, который при встряхивании пробирки поднимается в виде облачка.
На агаре возбудитель рожи растет в виде мелких росинчатых просвечивающихся колоний (S-форма), с трудом различимых невооруженным глазом, поэтому посевы лучше просматривать под лупой. При хроническом течении болезни возбудитель образует колонии в R-форме — крупные, с неровной волокнистой поверхностью и отходящими от края корнеобразными отростками.
В мазках из колоний гладкой формы обнаруживают в основном короткие прямые или слегка изогнутые палочки, а из колоний шероховатой формы наряду с короткими тонкими палочками встречаются удлиненные цепочки или нити.
Окрашенные флуоресцирующей рожистой сывороткой бактерии люминесцируют ярким зеленоватым светом с более интенсивным свечением (ободком) по их периферии.
Выделенную культуру идентифицируют по морфологическим, тинкториальным, культуральным и биохимическим свойствам, а также в реакции агглютинации (РА) с позитивной сывороткой, для чего чистую, культуру высевают в пробирки с МПБ, МПА, полужидким агаром и на среды Гисса с глюкозой, лактозой, сахарозой и маннитом. Подвижность культуры определяют высевом в полужидкий агар. Учет проводят через 18—24 ч инкубирования в термостате при температуре 36—37 °С.
Для определения сероводорода под пробку засеянной пробирки с МПБ помещают фильтровальную бумажку, пропитанную раствором уксуснокислого свинца (66 г уксуснокислого свинца на 100 см3 дистиллированной воды). При наличии сероводорода через сутки инкубации в термостате бумажка чернеет. Ставят пробу на каталазу.
Реакцию агглютинации ставят на стекле с позитивной сывороткой, в качестве которой используют гипериммунную (лечебную) рожистую сыворотку. На предметное стекдо наносят каплю сьюоротки в разведении 1 : 50, затем вносят суточную агаровую культуру и тщательно растирают её. В положительном случае агглютинация наступает быстро, агглютинат имеет вид плотных мелких комочков.
Культуру, не обладающую подвижностью, образующую сероводород, не образующую каталазу, разлагающую с образованием кислоты без газа глюкозу, лактозу и не разлагающую сахарозу, маннит, дающую положительную РА с позитивной сывороткой, относят к возбудителю рожи свиней.
Постановка биологической пробы. Для заражения используют суспензию из паренхиматозных органов, суточную бульонную или смыв 1 —2-суточной агаровой культуры.
Кусочки органов размельчают и тщательно растирают в стерильной ступке с небольшим количеством физиологического раствора. Для заражения суспензию разводят стерильным физраствором 1:10. Полученную взвесь или культуру вводят подкожно двум белым мышам массой 16—18 г в дозе 0,1—0,2 см3.
Наблюдение за зараженными животными ведут в течение 5 сут. При наличии возбудителя рожи гибель животных наступает через 2—4 сут. При заражении суспензией материала от свиней- "хроников" или слабо-вирулентными культурами подопытные животные гибнут в более поздние сроки или не гибнут вообще. Из органов павших мышей делают посев в МПБ и на МПА для выделения культуры возбудителя.
Лабораторный диагноз на рожу считают установленным при получении одного из следующих показателей:
-обнаружения возбудителя рожи в исходном материале (или в смешанной культуре) методом флуоресцирующих антител (без,выделения чистой культуры);
-выделение из патологического материала культуры со свойствами, характерными для возбудителя;
-гибель зараженных лабораторных животных и выделение из органов культуры со свойствами, характерными для возбудителя рожи, если даже в посевах из исходного материала культуры возбудителя не выделено.
Дифференциация листерий от возбудителя рожи.
При бактериологическом исследовании мяса на листериоз и рожу свиней (срок исследования — 7 лет) проводят дифференциацию выделенных культур по морфологическим, биохимическим признакам и вирулентности (данные представлены в табл.).
Таблица. Дифференцирующие признаки листерий и возбудителя рожи свиней
| Признак | Возбудидель листериоза | Возбудитель рожи свиней |
| Морфология в мазках - отпечатках | Неспорообразующие короткие палочка с закругленными концами. Располагаются поодиночке, попарно, в форме римской цифры V . | Неспорообразующие, тонкие, прямые или слегка изогнутые палочки, иногда нити. |
| Рост на МПА | Мелкие росинчатые, прозрачные колонии. Через 2-3 суток наблюдается помутнение колоний. | Мелкие росинчатые, прозрачные колонии. |
| Рост на МПБ | Небольшое помутнение с образованием слизистого осадка, поднимающегося при встряхивании в виде косички. | Легкое помутнение, поднимающегося при встряхивании осадок в виде облака. |
| Морфология в мазках из культуры | Короткие, прямые, овоидные палочки, иногда почти кокки, располагаются поодиночке или кучками. | Короткие, прямые или слегка изогнутые палочки; При хроническом течении инфекции- как короткие, тонкие палочки, так и удлиненные цепочки и нити. |
| Окраска по Граму | Положительная | Положительная |
| Подвижность | Подвижен в молодой 6-12 часовой культуре, выращенной при комнатной температуре. | Неподвижен |
| Салицин | Разлагает | Не разлагает |
| Проба на каталазу | Положительная | Отрицательная |
| Индикаторные среды | Обесцвечивает | Не обесцвечивает |
| РА с позитивной листериозной сывороткой | Положительная | Отрицательная |
| Коньюктивальная проба на морских свинках | Положительная | Отрицательная |
| Внутрикожная проба | Положительная | Отрицательная |
При необходимости дополнительной дифференциации бактерий листериоза от бактерий рожи свиней применяют посевы: на питательный желатин, на углеводную среду с салицином, на мясо-пептонный печеночный агар с 0,01 % теллурита калия, на мясо-пептонный агар с кровью, а также ставят конъюнктивальную пробу на морских свинках.
Бактерии листериоза в отличие от бактерий рожи свиней на желатине дают медленный рост в виде узловатой нити с неровными краями и пушистыми отростками, желатин не разжижают, ферментируют салицин, вызывают гемолиз на агаре с кровью, растут на мясо-пептонном печеночном агаре с 0,5 % глюкозы, 3 % глицерина и 0*01 % теллурита калия в виде мелких черных колоний и вызывают кератоконъюнктивит у морских свинок.
Ветеринарно-санитарная оценка при пастереллезе, роже свиней и листериозе.
Туши и все субпродукты от больных и подозрительных по заболеванию животных выпускать в сыром виде запрещается.
При истощении и наличии дегенеративных или других патологических (абсцессы) изменений в мускулатуре - туша со всеми внутренними органами подлежит утилизации.
При отсутствии патологических изменений в туше и внутренних органах решение об использовании их принимают после бактериологического исследования (за исключением листериоза) на сальмонеллы; при обнаружении в мышцах или внутренних органах сальмонелл внутренние органы направляют на утилизацию или уничтожают, а туши выпускают после проварки или перерабатывают на консервы.
При отсутствии патологических изменений в мускулатуре туши, но отрицательном результате бактериологического исследования на сальмонеллы туши обезвреживают действием высокой температуры (проварка, изготовление мясных хлебов и консервов) по установленным режимам, а внутренние органы направляют на утилизацию или уничтожение. При отсутствии сальмонелл тушу, шпик и внутренние органы разрешается перерабатывать на вареные или варено-копченые колбасы, а также на варено-копченые грудинки и корейки или консервы с соблюдением установленного термического режима или направляют на проварку.
Внутренние органы, кишки и кровь, имеющие патологические изменения, а также головы от больных листериозом животных во всех случаях направляют на утилизацию с обезвреживанием при температуре не ниже 100 °С или проварку при этой же температуре в течение 1 ч.
Шкуры дезинфицируют согласно наставлению по их дезинфекции. При пастереллезе птицы внутренние органы утилизируют, тушки направляют на проварку, прожарку или на переработку на консервы. При листериозе — голову и пораженные органы утилизируют. Тушки и непораженные органы проваривают. При рожистой септицемии внутренние органы утилизируют, а тушку при отсутствии изменений в мышцах проваривают, при наличии дегенеративных изменений утилизируют.
